石榴皮多酚抑菌活性研究及應用

第1章 概述 1
1.1 石榴資源概況 1
1.2 石榴皮的生物活性成分 2
1.3 石榴皮多酚的生物活性作用 4
1.3.1 抗氧化作用 4
1.3.2 抑菌作用 5
1.3.3 抗病毒作用 6
1.3.4 心血管保護作用 6
1.3.5 抗炎作用 7
1.3.6 抗腫瘤作用 7
1.4 石榴皮多酚的提取方法 8
1.4.1 溶劑萃取法 8
1.4.2 超聲波輔助提取法 8
1.4.3 微波輔助提取法 9
1.4.4 超臨界流體萃取法 10
1.5 石榴皮多酚的安全性 10
參考文獻 11
第2章 石榴皮多酚的提取、純化及抑菌活性初探 16
2.1 引言 16
2.2 材料與方法 18
2.2.1 試劑與儀器 18
2.2.2 石榴皮單寧的提取 20
2.2.3 石榴皮單寧的純化 20
2.2.4 高效液相色譜分析 21
2.2.5 抑菌效果研究 22
2.3 結果與分析 23
2.3.1 液相色譜檢測石榴皮提取物的成分及含量 23
2.3.2 抑菌效果評價 25
2.4 小結 27
參考文獻 28
第3章 安石榴苷對金黃色葡萄球菌細胞膜完整性及細胞形態(tài)的影響 31
3.1 引言 31
3.2 材料與方法 32
3.2.1 試劑與儀器 32
3.2.2 最小抑菌濃度的測定 35
3.2.3 生長曲線的測定 36
3.2.4 膜電位的測定 37
3.2.5 鉀離子流出的測定 37
3.2.6 掃描電子顯微鏡觀察 38
3.2.7 透射電子顯微鏡觀察 38
3.3 結果與分析 40
3.3.1 最小抑菌濃度 40
3.3.2 安石榴苷對細菌生長的影響 40
3.3.3 安石榴苷對膜電位的影響 41
3.3.4 安石榴苷對鉀離子流出的影響 42
3.3.5 掃描電子顯微鏡圖譜 43
3.3.6 透射電子顯微鏡圖譜 44
3.4 小結 45
參考文獻 47
第4章 安石榴苷對金黃色葡萄球菌毒力因子表達的影響 51
4.1 引言 51
4.2 材料與方法 54
4.2.1 試劑與儀器 54
4.2.2 菌種活化及菌懸液制備 56
4.2.3 菌落計數(shù) 56
4.2.4 溶血活性的測定 57
4.2.5 凝固酶效價的測定 58
4.2.6 總腸毒素的檢測 58
4.2.7 qRT-PCR  59
4.3 結果與分析 63
4.3.1 安石榴苷對細菌生長的影響 63
4.3.2 安石榴苷對金黃色葡萄球菌溶血活性的影響 64
4.3.3 安石榴苷對金黃色葡萄球菌凝固酶表達的影響 65
4.3.4 安石榴苷對金黃色葡萄球菌總腸毒素表達的影響 65
4.3.5 安石榴苷對金黃色葡萄球菌毒力基因表達的影響 66
4.4 小結 71
參考文獻 72
第5章 亞致死濃度下安石榴苷對金黃色葡萄球菌生物膜形成的影響 75
5.1 引言 75
5.2 材料與方法 80
5.2.1 試劑與儀器 80
5.2.2 菌種活化及菌懸液制備 83
5.2.3 亞抑菌濃度下生長曲線的測定 83
5.2.4 結晶紫染色法檢測安石榴苷對生物膜形成的影響 84
5.2.5 MTT染色法檢測安石榴苷對生物膜代謝的影響 85
5.2.6 生物膜中活菌的計數(shù) 85
5.2.7 掃描電鏡觀察生物膜的形態(tài) 85
5.2.8 激光共聚焦顯微鏡觀察生物膜的形態(tài) 86
5.2.9 細菌表面疏水率測定 87
5.2.10 qRT-PCR  87
5.3 結果與分析 91
5.3.1 亞抑菌濃度的安石榴苷對細菌生長的影響 91
5.3.2 結晶紫染色法反映的抗生物膜效果 92
5.3.3 MTT染色法顯示的抗生物膜效果 94
5.3.4 生物膜中活菌的數(shù)量 94
5.3.5 掃描電鏡觀察安石榴苷對金黃色葡萄球菌生物膜的影響 96
5.3.6 激光共聚焦顯微鏡觀察安石榴苷對金黃色葡萄球菌生物膜的影響 97
5.3.7 安石榴苷對金黃色葡萄球菌表面疏水率的影響 98
5.3.8 安石榴苷對金黃色葡萄球菌生物膜相關基因轉錄水平的影響 99
5.4 小結 102
參考文獻 104
第6章 亞致死濃度下安石榴苷對金黃色葡萄球菌蛋白組表達的影響 108
6.1 引言 108
6.2 材料與方法 114
6.2.1 試劑與儀器 114
6.2.2 蛋白質的提取與定量 116
6.2.3 聚丙烯酰胺凝膠電泳 118
6.2.4 蛋白質的消化 118
6.2.5 多肽的脫鹽純化與定量 119
6.2.6 多肽的標記 119
6.2.7 液相色譜-質譜聯(lián)用分析 122
6.2.8 蛋白質鑒定及數(shù)據(jù)庫查詢 123
6.2.9 生物信息學分析 124
6.3 結果與分析 125
6.3.1 安石榴苷對金黃色葡萄球菌生長的抑制作用 125
6.3.2 聚丙烯酰胺凝膠電泳圖譜分析 126
6.3.3 蛋白質定量與聚類分析 127
6.3.4 蛋白質的細胞定位 128
6.3.5 表達量顯著降低的蛋白 128
6.3.6 表達量顯著增加的蛋白 137
6.3.7 安石榴苷對金黃色葡萄球菌代謝通路的影響 140
6.3.8 蛋白相互作用分析 146
6.4 小結 148
參考文獻 154
第7章 石榴皮多酚的應用 157
7.1 在食品防腐保鮮領域的應用 157
7.2 在其他領域的應用 159
參考文獻 161