基因工程：動物細(xì)胞制藥關(guān)鍵技術(shù)

第一章  動物細(xì)胞培養(yǎng)      001
第一節(jié)  動物細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識    002
一、基本概念    002
二、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件    003
三、動物細(xì)胞培養(yǎng)實驗室    004
四、無菌技術(shù)    006
第二節(jié)  動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)    007
一、動物細(xì)胞凍存與復(fù)蘇    007
二、動物細(xì)胞傳代    009
三、動物細(xì)胞懸浮馴化及無血清培養(yǎng)    011
四、動物細(xì)胞分批培養(yǎng)    015
五、動物細(xì)胞補料分批培養(yǎng)    016
六、動物細(xì)胞灌流技術(shù)培養(yǎng)    022
第三節(jié)  動物細(xì)胞生物特性分析    025
一、動物細(xì)胞生長曲線和倍增時間分析    025
二、動物細(xì)胞增殖測定    028
三、動物細(xì)胞凋亡檢測    031
四、動物細(xì)胞周期檢測    036
參考文獻    038
第二章  動物細(xì)胞載體    041
第一節(jié)  質(zhì)粒載體構(gòu)建    042
一、目的基因獲取    042
二、限制性內(nèi)切酶酶切    046
三、目的片段和載體連接    048
四、重組子轉(zhuǎn)化    050
五、重組載體篩選    052
六、重組載體鑒定    052
第二節(jié)  病毒載體構(gòu)建    056
一、桿狀病毒表達載體    056
二、慢病毒載體    057
三、腺病毒載體    059
四、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體    060
參考文獻    061
第三章  目的基因?qū)?   065
第一節(jié)  動物細(xì)胞轉(zhuǎn)染    066
一、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染    066
二、聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染    067
三、電穿孔轉(zhuǎn)染    068
四、影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染的因素    069
第二節(jié)  細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率檢測    070
一、流式細(xì)胞儀檢測    071
二、熒光顯微鏡檢測    071
參考文獻    072
第四章  重組穩(wěn)定細(xì)胞株篩選和評估    075
第一節(jié)  重組穩(wěn)定細(xì)胞池篩選    076
一、常用的抗生素篩選標(biāo)記    076
二、遺傳霉素篩選    078
三、DHFR篩選    079
四、GS篩選    080
第二節(jié)  重組單克隆細(xì)胞株分離    081
一、有限稀釋法    081
二、流式細(xì)胞熒光分選技術(shù)    082
三、ClonePix    083
四、克隆環(huán)法    084
五、其他篩選方法    085
第三節(jié)  重組穩(wěn)定細(xì)胞系評估    086
一、細(xì)胞污染檢測    086
二、細(xì)胞系鑒定    087
三、外源基因整合分析    089
四、重組蛋白表達分析    098
參考文獻    101
第五章  重組蛋白分離純化     103
第一節(jié)  重組蛋白純化策略及設(shè)備    104
一、重組蛋白純化策略    104
二、重組蛋白純化設(shè)備    107
第二節(jié)  重組蛋白沉淀和膜分離技術(shù)    116
一、蛋白質(zhì)沉淀法    117
二、膜分離技術(shù)    118
第三節(jié)  重組蛋白分離色譜技術(shù)    119
一、親和色譜法    120
二、疏水色譜法    122
三、凝膠過濾色譜法    124
四、離子交換色譜法    126
五、反相色譜法    129
參考文獻    131
第六章  重組蛋白藥物鑒定與分析     135
第一節(jié)  蛋白質(zhì)理化特性    136
一、分子量測定    136
二、等電點與電荷異質(zhì)性分析    141
三、肽圖分析    144
四、氨基酸組成分析    145
五、N端氨基酸測序    150
六、C端氨基酸測序    152
七、二硫鍵分析    153
八、高級結(jié)構(gòu)分析    155
第二節(jié)  蛋白質(zhì)含量分析    159
一、凱氏定氮法    159
二、Lowry法    161
三、BCA法    162
四、Bradford法    164
五、紫外吸收法    166
六、高效液相色譜法    166
第三節(jié)  蛋白質(zhì)純度分析    168
一、宿主細(xì)胞蛋白殘留分析    168
二、宿主細(xì)胞DNA殘留分析    170
三、殘留抗生素檢測    172
四、其他成分檢測    173
第四節(jié)  糖基化修飾分析    181
一、分離富集親和技術(shù)    182
二、糖蛋白鑒定/糖基化位點的確定方法    187
三、糖鏈結(jié)構(gòu)分析    189
第五節(jié)  生物學(xué)活性測定    206
一、體外法評估    207
二、體內(nèi)法評估    211
第六節(jié)  免疫化學(xué)特性分析    213
一、親和力測定    213
二、抗原結(jié)合表位測定    217
參考文獻    219
第七章  重組蛋白藥物新技術(shù)      223
第一節(jié)  人工智能與蛋白藥物設(shè)計    224
一、核苷酸及蛋白質(zhì)相關(guān)數(shù)據(jù)庫    224
二、基因信息分析及密碼子優(yōu)化    226
三、蛋白質(zhì)信息分析及結(jié)構(gòu)預(yù)測    241
四、人工智能設(shè)計    255
第二節(jié)  miRNA篩選與應(yīng)用    269
一、miRNA篩選    269
二、miRNA應(yīng)用    273
第三節(jié)  基因編輯技術(shù)    279
一、動物細(xì)胞CRISPR基因敲除    279
二、動物細(xì)胞基因敲入    289
第四節(jié)  表觀遺傳學(xué)技術(shù)    299
一、DNA甲基化分析    299
二、組蛋白修飾分析    305
三、非編碼RNA分析    314
第五節(jié)  DNA與蛋白質(zhì)相互作用分析    323
一、凝膠遷移實驗    323
二、DNaseⅠ足跡實驗    330
三、酵母單雜交系統(tǒng)    337
四、染色質(zhì)免疫沉淀    351
五、噬菌體展示技術(shù)（DNA與蛋白質(zhì)相互作用）    354
參考文獻    356
附錄1  常用緩沖液及試劑的配制    363
附錄2  中英文詞匯表    369