橘小實蠅嗅覺通訊的分子機制研究

第1章　緒論  001
1.1  橘小實蠅生物學(xué)和生態(tài)學(xué)特性  002
1.1.1　橘小實蠅形態(tài)特征與生活習(xí)性  002
1.1.2　橘小實蠅生活史  004
1.1.3　橘小實蠅為害特點  005
1.1.4　橘小實蠅適生環(huán)境與種群動態(tài)  007
1.1.5　橘小實蠅入侵風(fēng)險評估及適生性分析  007
1.1.6　橘小實蠅綜合控制策略  009
1.1.7　橘小實蠅化學(xué)生態(tài)學(xué)研究概述  017
1.2  應(yīng)用甲基丁香酚防控橘小實蠅的研究進展  028
1.2.1　甲基丁香酚引誘橘小實蠅雄成蟲的生理學(xué)基礎(chǔ)  029
1.2.2　甲基丁香酚誘捕橘小實蠅影響因素及田間應(yīng)用  030
1.2.3　甲基丁香酚衍生化合物  031
1.2.4　需解決的科學(xué)問題  032
1.3  研究目的和研究思路  033
1.3.1　研究目的  033
1.3.2　研究思路  033
1.4  研究技術(shù)路線  034
參考文獻  035

第2章　氣味結(jié)合蛋白在橘小實蠅雄成蟲識別甲基丁香酚過程中分子功能的研究  052
2.1  引言  053
2.2  材料與方法  054
2.2.1　供試昆蟲  054
2.2.2　供試試劑與耗材  054
2.2.3　主要儀器  055
2.2.4　溶液的配置  056
2.2.5　試驗方法  057
2.3  結(jié)果與分析  072
2.3.1　人工汰選后對甲基丁香酚無趨性雄成蟲比例的變化  072
2.3.2　對甲基丁香酚有趨性和無趨性雄成蟲觸角iTRAQ蛋白組鑒定與結(jié)果分析  073
2.3.3　觸角差異蛋白GO功能注釋與分析  078
2.3.4　觸角差異蛋白KEGG通路分析  079
2.3.5　qRT-PCR檢測差異蛋白編碼基因在有、無趨性雄成蟲觸角的表達量  080
2.3.6　氣味結(jié)合蛋白進化樹分析  081
2.3.7　性別與日齡對橘小實蠅成蟲對甲基丁香酚趨性及OBPs表達量的影響  082
2.3.8　甲基丁香酚顯著誘導(dǎo)雄成蟲觸角OBP2表達量上調(diào)  083
2.3.9　OBP2、OBP50c、OB56D-1、OB56D-2生物學(xué)功能的研究  085
2.4  氣味結(jié)合蛋白OBP2調(diào)控橘小實蠅雄成蟲趨向ME  089
參考文獻  091

第3章　氣味受體在調(diào)控橘小實蠅雄成蟲對甲基丁香酚趨性行為的分子功能研究  095
3.1  引言  096
3.2  試驗方法  097
3.2.1　供試昆蟲  097
3.2.2　供試試劑  097
3.2.3　主要儀器  098
3.2.4　溶液的配置  098
3.2.5　橘小實蠅雄成蟲處理與觸角樣品收集  099
3.2.6　觸角總RNA提取、cDNA文庫構(gòu)建及Illumina測序  099
3.2.7　序列De Novo組裝和Unigenes功能注釋  100
3.2.8　差異表達基因的篩選與分析  101
3.2.9　差異表達基因GO功能注釋、GO富集與KEGG富集分析  102
3.2.10　熒光定量PCR（qRT-PCR）驗證基因表達量  103
3.2.11　OR63a-1和OR88a基因序列分析與系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建  104
3.2.12　不同日齡和日節(jié)律對橘小實蠅雄成蟲對ME的趨性及OR63a-1、OR88a表達量的影響  104
3.2.13　OR63a-1和OR88a在爪蟾卵母細胞表達和雙電極電壓鉗記錄  104
3.2.14　RNA干擾驗證OR63a-1和OR88a的生物學(xué)功能  106
3.2.15　數(shù)據(jù)分析  106
3.3  試驗結(jié)果  107
3.3.1　RNA-Seq數(shù)據(jù)質(zhì)控與評估  107
3.3.2　不同處理組樣本轉(zhuǎn)錄組測序與De novo組裝分析  109
3.3.3　轉(zhuǎn)錄組Unigenes基本功能注釋  112
3.3.4　ME處理組與MO對照組橘小實蠅雄成蟲觸角差異表達基因分析  115
3.3.5　差異表達基因的GO分類、GO富集與KEGG通路富集分析  115
3.3.6　與嗅覺傳導(dǎo)相關(guān)的差異表達基因鑒定  117
3.3.7　qRT-PCR檢測差異基因的表達量  118
3.3.8　氣味受體進化樹分析  121
3.3.9　日齡和日節(jié)律對橘小實蠅雄成蟲趨向ME能力及OR63a-1、OR88a表達量的影響  122
3.3.10　爪蟾卵母細胞系統(tǒng)研究OR63a-1、OR88a分子功能  123
3.3.11　OR88a調(diào)控橘小實蠅雄成蟲對ME的趨性行為  124
3.3.12　橘小實蠅雄成蟲識別、轉(zhuǎn)導(dǎo)ME的分子模型  126
3.4  OR88a調(diào)控橘小實蠅雄成蟲對ME的趨性行為  127
參考文獻  128

第4章　結(jié)論與討論、創(chuàng)新點與展望  132
4.1  結(jié)論  133
4.2  討論  134
4.2.1　OBP2參與橘小實蠅雄成蟲識別ME的分子過程  134
4.2.2　OR88a調(diào)控橘小實蠅性成熟雄成蟲對ME的趨性行為  136
4.2.3　橘小實蠅性成熟雄成蟲識別ME的分子模型  139
4.3  創(chuàng)新點  140
4.4  展望  140
參考文獻  141

附錄　嗅覺蛋白質(zhì)二級質(zhì)譜圖譜  146