地骨皮治療糖尿病藥效物質(zhì)

1概論001
1.1地骨皮具有治療消渴病的作用001
1.1.1醫(yī)學(xué)古籍描述地骨皮用于治療消渴病002
1.1.2現(xiàn)代研究證明地骨皮具有降血糖等多重功效003
1.2地骨皮中的藥效成分005
1.2.1生物堿類005
1.2.2酰胺類006
1.2.3肽類007
1.2.4黃酮類007
1.2.5蒽醌類008
1.2.6香豆素類009
1.2.7木脂素類009
1.2.8萜類010
1.2.9甾醇與類固醇類010
1.2.10有機(jī)酸及其衍生物011
1.3中藥發(fā)揮降糖作用的藥理學(xué)機(jī)制012
1.3.1促進(jìn)胰島素分泌，增加血清胰島素的含量012
1.3.2增加胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗013
1.3.3促進(jìn)外周組織和靶器官對糖的利用015
1.3.4類胰島素樣作用015
1.3.5抑制α-葡萄糖苷酶活性，延緩腸道吸收葡萄糖015
1.3.6抑制醛糖還原酶，抑制蛋白質(zhì)非酶糖基化016
1.4中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究方法016
1.4.1系統(tǒng)分離方法結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究017
1.4.2生物活性篩選/化學(xué)在線分析技術(shù)017
1.4.3中藥藥效組分指紋圖譜018
1.4.4中藥配位化學(xué)研究018
1.4.5藥味與藥量加減拆方研究019
1.4.6中藥血清藥物化學(xué)研究019
1.4.7基因芯片技術(shù)在中藥基因組學(xué)研究中的應(yīng)用019
1.52型糖尿病藥物篩選模型020
1.5.1動物模型020
1.5.2細(xì)胞水平篩選模型021
1.5.3分子水平篩選模型023
1.5.4高通量篩選025
2地骨皮降糖作用研究028
2.1材料與儀器029
2.1.1實(shí)驗(yàn)動物029
2.1.2主要試劑與儀器029
2.1.3試驗(yàn)藥物030
2.1.4小鼠飼料031
2.2實(shí)驗(yàn)方法031
2.2.1建立IR動物模型031
2.2.2實(shí)驗(yàn)動物分組與給藥031
2.2.3口服耐糖量測定031
2.2.4血清胰島素測定方法032
2.2.5血清學(xué)指標(biāo)檢測方法032
2.2.6胰島素敏感指數(shù)計算032
2.2.7肝臟組織HE染色032
2.2.8統(tǒng)計學(xué)方法033
2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果034
2.3.1小鼠體重變化034
2.3.2小鼠OGTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較034
2.3.3小鼠FBG水平變化035
2.3.4小鼠FINS水平變化035
2.3.5小鼠血脂水平的變化036
2.3.6小鼠胰島素敏感指數(shù)036
2.3.7小鼠肝臟的病理變化037
2.4討論038
2.4.1高脂喂養(yǎng)加小劑量STZ建立2型糖尿病IR模型038
2.4.2地骨皮對IR小鼠體重的影響038
2.4.3地骨皮對IR小鼠血糖的影響039
2.4.4地骨皮對IR小鼠胰島素水平的影響039
2.4.5地骨皮對IR小鼠血脂的影響039
2.4.6地骨皮對IR小鼠肝臟脂質(zhì)沉積的影響039
2.4.7地骨皮對IR小鼠胰島素抵抗的評估040
3活性介導(dǎo)的地骨皮NF-κB抑制作用成分研究041
3.1材料與儀器042
3.1.1主要試劑與儀器042
3.1.2試驗(yàn)藥物043
3.2實(shí)驗(yàn)方法043
3.2.1NF-κB靶標(biāo)生物活性跟蹤分離043
3.2.2NMR與MS分析044
3.2.3NF-κB抑制活性試驗(yàn)045
3.2.4數(shù)據(jù)處理方法045
3.3結(jié)果與討論045
3.3.1NF-κB靶標(biāo)活性跟蹤分離藥效物質(zhì)045
3.3.2化合物結(jié)構(gòu)表征046
3.3.3酚酰胺類化合物對NF-κB體外抑制活性052
4活性介導(dǎo)的地骨皮PPARγ激動作用成分研究056
4.1材料與儀器057
4.1.1主要試劑與儀器057
4.1.2試驗(yàn)藥物059
4.2實(shí)驗(yàn)方法059
4.2.1PPARγ靶標(biāo)生物活性跟蹤分離059
4.2.2NMR與MS分析059
4.2.3PPARγ體外活性試驗(yàn)060
4.2.4數(shù)據(jù)處理方法061
4.3結(jié)果與討論061
4.3.1PPARγ激動作用部位與成分061
4.3.2脂肪酸是地骨皮激活PPARγ的主要成分062
4.3.3地骨皮中有機(jī)酸的PPARγ激活作用063
4.3.4棕櫚酸濃度與PPARγ的激活作用的相關(guān)性064
4.3.5棕櫚酸對PPARγ的激動作用具有配體依賴性065
5地骨皮及其酚酰胺類與脂肪酸的降糖機(jī)制研究066
5.1材料與儀器067
5.1.1實(shí)驗(yàn)動物067
5.1.2主要儀器與試劑068
5.1.3實(shí)時PCR引物069
5.2實(shí)驗(yàn)方法069
5.2.1蛋白免疫印跡法實(shí)驗(yàn)069
5.2.2實(shí)時-PCR實(shí)驗(yàn)073
5.2.3統(tǒng)計學(xué)方法074
5.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果074
5.3.1小鼠肝臟AMPK與p-AMPK蛋白表達(dá)水平變化074
5.3.2小鼠肝臟AMPKα1和AMPKα2基因轉(zhuǎn)錄水平變化075
5.3.3小鼠肝臟Akt與p-Akt蛋白表達(dá)水平變化075
5.3.4小鼠肝臟與骨骼肌NF-κB蛋白表達(dá)水平變化077
5.3.5小鼠肝臟與骨骼肌PPARγ蛋白表達(dá)水平變化077
5.3.6小鼠骨骼肌AS160與p-AS160蛋白表達(dá)水平變化078
5.3.7小鼠骨骼肌GLUT4基因轉(zhuǎn)錄水平變化078
5.4討論080
5.4.1AMPK蛋白表達(dá)與活性對改善IR的影響080
5.4.2AMPKα1與AMPKα2亞基基因表達(dá)對改善IR的影響081
5.4.3PI3K/Akt信號通路與胰島素抵抗的關(guān)系082
5.4.4NF-κB信號通路與胰島素抵抗的關(guān)系083
5.4.5PPARγ信號通路與胰島素抵抗的關(guān)系084
5.4.6地骨皮及其化合物對小鼠骨骼肌IR信號通路的作用機(jī)制085
6結(jié)論與展望087
參考文獻(xiàn)090
附錄102
S1.化合物1的1H NMR(500MHz，CD3OD)譜102
S2.化合物1的13C NMR(125MHz，CD3OD)譜103
S3.化合物1的HSQC譜103
S4.化合物1的HMBC譜104
S5.化合物1的1H NMR(400MHz，DMSO-d6)譜104
S6.化合物2的13C NMR(100MHz，DMSO-d6)譜105
S7.化合物3的1H NMR(500MHz，CD3OD)譜105
S8.化合物3的13C NMR(125MHz，CD3OD)譜106
S9.化合物3的HSQC譜106
S10.化合物3的HMBC譜107
S11.化合物4的1H NMR(500MHz，CD3OD)譜107
S12.化合物4的13C NMR(125MHz，CD3OD)譜108
S13.化合物4的HSQC譜108
S14.化合物4的HMBC譜109
S15.化合物5的1H NMR(400MHz，CD3OD)譜109
S16.化合物5的13C NMR(100MHz，CD3OD)譜110
S17.化合物5的HSQC譜110
S18.化合物5的HMBC譜111
S19.化合物6的1H NMR(400MHz，CD3OD)譜111
S20.化合物6的13C NMR(100MHz，CD3OD)譜112
S21.化合物6的HSQC譜112
S22.化合物6的HMBC譜113
S23.化合物7的1H NMR(400MHz，CD3OD)譜113
S24.化合物7的13C NMR(100MHz，CD3OD)譜114
S25.化合物7的HSQC譜114
S26.化合物7的HMBC譜115
S27.化合物8的1H NMR(400MHz，CD3OD)譜115
S28.化合物8的13C NMR(100MHz，CD3OD)譜116
S29.化合物9的1H NMR(400MHz，CD3OD)譜116
S30.化合物9的13C NMR(100MHz，CD3OD)譜117
S31.化合物9的HSQC譜117
S32.化合物9的HMBC譜118
S33.富含棕櫚酸餾分的1H NMR(500MHz，CD3OD)譜118
S34.富含棕櫚酸餾分的13C NMR(125MHz，CD3OD)譜119
S35.富含棕櫚酸餾分的HSQC譜119
S36.富含棕櫚酸餾分的HMBC譜120